要實現(xiàn)X1700 S-HPLC超高效液相系統(tǒng)色譜分析,除必須制備出裝填粒度小于2μm固定相的色譜柱外,還必須提供高壓溶劑輸送單元、低死體積的色譜系統(tǒng)、快速的檢測器、快速自動進樣器和高速數(shù)據(jù)采集、控制系統(tǒng)等,才能促成色譜的實現(xiàn)。
基于1.7μm小顆粒技術(shù)的液相系統(tǒng)與人們熟知的高效液相色譜(HPLC)技術(shù),具有相同的分離原理。不同的是,超高效液相系統(tǒng)不僅比HPLC具有更高的分離能力,而且結(jié)束了人們多年不得不在速度和分離度之間取舍的歷史。使用系統(tǒng)可以在很寬的線速度、流速和反壓下進行高效的分離工作,并獲得優(yōu)異的結(jié)果。
提高分離度系統(tǒng)發(fā)揮了1.7μm顆粒提供柱效增高的全部*性。尤其是1.7μm顆粒提供的柱效比5μm顆粒提高了3倍。因為分離度與粒度的平方根成反比,1.7μm顆粒的分離度比5μm顆粒提高了70%。在梯度分離中也具有同樣的*性。
提高分析速度由于系統(tǒng)采用1.7μm顆粒,柱長則可以比使用5μm顆粒時縮短3倍而保持柱效不變,而且使分離在高3倍的流速下進行,結(jié)果使分離時間縮短而分離度保持不變。
提高檢測靈敏度濃縮樣品和采用各種高靈敏度的檢測器都能提高靈敏度,而在X1700 S-HPLC超高效液相系統(tǒng)中通過減小顆粒度,使色譜峰變得更窄,信噪比(S/N)增大,靈敏度得到額外的提高。
提高質(zhì)譜離子化效率減小基質(zhì)效應(yīng)LC-MS已經(jīng)是液相色譜發(fā)展的主流,能夠充分發(fā)揮LC高分離度和MS高靈敏度的優(yōu)勢,超高效液相系統(tǒng)與MS的聯(lián)用使這種優(yōu)勢更加明顯:一方面,系統(tǒng)達到最佳線速度時,其流動相流速一般在0.25~0.50ml/min之間,這與質(zhì)譜能承受的流速更加匹配(API接口一般能承受0.20ml/min),使離子化效率增加,而新的超高效液相系統(tǒng)的流量更可低至200nl/min,可以不需分流而直接進入質(zhì)譜;另一方面,超高效液相系統(tǒng)的分離度比HPLC有很大提高,其色譜峰擴展很小,峰濃度很高,這樣不但有利于化合物的離子化,同時有助于與基質(zhì)雜質(zhì)分離,在一定程度上能降低基質(zhì)效應(yīng),從而使靈敏度和重現(xiàn)性得到提高。